Giulia Rosar, de Eurofins Tecna, ofrece una breve visión general del desarrollo de las tecnologías de cribado rápido, explicando cómo Eurofins pasó de los primeros modelos a los métodos automatizados sin disolventes, y da consejos sobre cómo elegir el mejor producto para las diferentes necesidades de ensayo.
Los ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) se popularizaron por primera vez en el cribado de micotoxinas a finales de la década de 1970, y durante 30 años se han utilizado ampliamente, en particular entre las grandes plantas de procesamiento de grano, los laboratorios de servicios y los productores de piensos. La falta de un procedimiento de limpieza, la facilidad de uso, la capacidad de procesar muestras paralelas, el tiempo de obtención de resultados y el balance general de costes fueron incentivos suficientes para compensar algunos sesgos de rendimiento, los efectos de la matriz y la detección no selectiva del metabolito de las micotoxinas
Desde la década de 2000, se han lanzado y mejorado varios métodos rápidos de cribado de primer nivel: Los inmunoensayos de flujo lateral (LFIA), también denominados ensayos inmunocromatográficos o inmunoensayos con coloides de oro, han sido especialmente populares en la industria alimentaria debido a su rapidez y a su idoneidad para realizar un cribado rápido y sencillo in situ de las mercancías entrantes. Esta tecnología respondió bien a la introducción de límites reglamentarios para las micotoxinas en los productos alimenticios, especialmente para aquellas empresas que aún no están equipadas con un laboratorio de ELISA. Con el paso de los años, la típica extracción con disolventes fue sustituida por soluciones acuosas sin metanol y sin etanol. El tiempo de obtención de resultados se ha acortado y la precisión ha mejorado
Por otra parte, la tendencia de los laboratorios de servicio es abandonar los ELISA y orientarse hacia el análisis instrumental, ya que la inversión ha disminuido en general en los últimos años y la purificación de las muestras se ha hecho más fácil.
Así pues, más de 50 años después de su debut, ¿cuál es el papel actual de los ELISA en el análisis de micotoxinas y cómo ha evolucionado esta tecnología?
Eurofins Tecna ha trabajado en este campo desde principios de la década de 2000 y ahora ofrece más de 20 productos diferentes para el cribado de micotoxinas. El objetivo es adaptar las diferentes soluciones a las distintas necesidades de las industrias de alimentos y piensos en términos de calidad, rapidez, seguridad, reproducibilidad y precio
Múltiples opciones para diferentes necesidades de análisis de micotoxinas
La solución más rentable disponible es la línea B ZERO, una cartera de kits calibrados con curva maestra desarrollada para analizar una amplia gama de micotoxinas. La eliminación de la calibración física se apoya en la robustez de los reactivos. Dentro de cada experimento, es necesario ejecutar el estándar cero y las muestras, dedicando un pozo por determinación. Los análisis se abaratan significativamente si se ejecutan varias muestras en la misma sesión, y el coste de los calibradores no se amortiza. Las empresas que realizan varias verificaciones para múltiples toxinas pueden beneficiarse de la preparación compartida de muestras para micotoxinas en cereales, incluido el DON, y utilizar el mismo extracto para varios kits. Además, en lo que respecta a la investigación de la aflatoxina M1 en la leche, cabe destacar que no se requiere ninguna manipulación de la muestra, ya que la leche de vaca, cabra y oveja puede ejecutarse directamente en el ensayo con su contenido natural de grasa
Para el cribado de la leche, I’screen AFLA M1 y I’screen AFLA M1 leche son ampliamente utilizados en la industria láctea, los laboratorios de servicios y los organismos oficiales de control en el área mediterránea. Los kits muestran una alta correlación con la HPLC y una precisión, selectividad y robustez muy elevadas, junto con el hecho de que la leche se analiza mediante un paso rápido de centrifugación (según la directriz ISO 14675) o directamente con su contenido de grasa natural. Además, el tiempo de obtención de resultados es muy bajo; hasta 40 muestras se analizan en poco más de una hora. I’screen AFLA M1 ha obtenido el estatus de Método Probado de Rendimiento del Instituto de Investigación de la AOAC (Certificado AOAC nº 072002) para su uso con leche entera bovina cruda, leche desnatada y leche en polvo
Junto con la línea B ZERO e I’screen, los kits de prueba Celer están disponibles para detectar una amplia gama de micotoxinas, y vienen con cinco estándares, implementación de un solo pozo y un tiempo de ensayo de 15 a 20 minutos. La línea se caracteriza por una preparación de muestra compartida en agua-metanol para todas las micotoxinas en los cereales. Como alternativa, H2AFLA y H2DON son soluciones analíticas rápidas y sin disolventes para las aflatoxinas totales y el deoxinivalenol, respectivamente(Tabla 1).
Automatización para mejorar la eficiencia del laboratorio
El procesamiento automatizado de ELISA ahorra mucho tiempo de trabajo en el laboratorio y ofrece resultados precisos, lo que es especialmente importante en períodos de gran volumen. Eurofins Tecna se esfuerza por ofrecer a las industrias métodos totalmente automatizados para la realización de ELISAs. La mayoría de los kits están validados para el Bolt, un analizador automático compacto, flexible y fácil de usar de la empresa hermana Gold Standard Diagnostics. El Bolt soporta todos los pasos de procesamiento de ELISA en un modo totalmente walk-away, emitiendo un informe automático, apoyado por varios algoritmos de curva. El estricto protocolo de validación elimina todos los errores potenciales.
Los equipos de aplicación sobre el terreno pueden instalar una unidad Bolt y comenzar el análisis en unas tres horas, sin necesidad de ajustar o validar el método in situ
Los procesos automatizados son una ventaja para los volúmenes analíticos bajos o medios, especialmente para las sesiones de mezcla y emparejamiento, ya que el instrumento puede ejecutar de forma autónoma hasta cuatro métodos compatibles de la misma línea en un marco, sin desajustar los reactivos o quedarse atascado en múltiples sesiones paralelas. El mismo robot puede analizar potencialmente cualquier tipo de ELISA para diferentes objetivos y ya está validado para el análisis de residuos de antibióticos en alimentos de origen animal, patógenos alimentarios, alérgenos y glifosato
